細胞凍存和復(fù)蘇是在細胞研究和生物醫(yī)學領(lǐng)域中常見的實驗技術(shù)，用于長期保存和重復(fù)使用細胞。此步驟是細胞培養(yǎng)中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，直接影響細胞存活率和活力，關(guān)系到后續(xù)細胞實驗?zāi)芊癜凑沼媱澯行У剡M行。要想做好細胞凍存和復(fù)蘇，首先請牢記下面這四個字：慢凍快融！慢凍快融！慢凍快融！重要的事情說三遍！

那么細胞實驗中為什么要“慢凍快融"呢？

凍存細胞時，細胞內(nèi)外環(huán)境中的水會形成冰晶。如果直接將細胞凍存到 -196℃ 的液氮中，由于凍結(jié)過程中胞外溶液中的水先結(jié)冰，使胞外溶液不斷濃縮，引起細胞電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水及蛋白質(zhì)變性等，會導(dǎo)致細胞受到機械性損傷。

在冷凍保存時，細胞外環(huán)境中的水會結(jié)冰。冷卻速度的不同會導(dǎo)致細胞由于滲透脫水而發(fā)生不同程度的收縮。細胞外環(huán)境的滲透壓隨著水結(jié)成冰晶而不斷升高，冷卻速度越慢，細胞內(nèi)水分通過滲透作用移出細胞的時間就越長。因此，非常緩慢的冷卻可能會導(dǎo)致細胞因過度脫水而死亡 (A)。而快速冷卻 (C) 會導(dǎo)致細胞內(nèi)形成冰晶，這會導(dǎo)致細胞在復(fù)溫時死亡。中間冷卻速度 (B) 則可以平衡滲透脫水和細胞內(nèi)結(jié)冰形成的風險，通?？梢詫崿F(xiàn)細胞存活率的大幅提升。

如果在凍存液中加入保護劑 (如 sigma 二甲基亞砜，DMSO)，可使冰點降低，增加細胞滲透壓穩(wěn)定性。減緩慢速降溫過程中的脫水皺縮現(xiàn)象，在緩慢凍結(jié)時減少冰晶的生成，使細胞免受損傷[1]。

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