細胞污染是細胞培養(yǎng)過程中常見的問題，它會影響實驗結果的準確性和可靠性。以下是細胞污染的主要原因和相應的處理方法：

一、細胞污染的原因
1. 操作環(huán)境不潔凈
   -空氣因素：細胞培養(yǎng)室的空氣質量差是導致污染的常見因素之一。如果沒有安裝高效空氣過濾器（HEPA），外界空氣中的微生物（如細菌、真菌孢子）就容易進入培養(yǎng)環(huán)境。此外，人員頻繁進出培養(yǎng)室、通風系統(tǒng)不完善等也會增加空氣中微生物的含量。
  - 臺面和儀器設備：細胞培養(yǎng)操作通常在超凈工作臺中進行，但如果超凈工作臺的濾網(wǎng)長時間未更換、紫外燈殺菌不che底或者操作臺面在使用前未進行充分清潔和消毒，表面殘留的微生物就會污染細胞。另外，培養(yǎng)箱、離心機等儀器設備內部如果沒有定期清潔和消毒，也會成為污染源。
2. 實驗用品污染
  - 培養(yǎng)基和試劑：培養(yǎng)基的原材料、配制過程或者儲存條件不當都可能導致污染。例如，使用了過期的試劑、培養(yǎng)基在配制后沒有及時滅菌或者滅菌不che底，就會引入細菌、真菌等微生物。此外，血清是細胞培養(yǎng)中常用的添加成分，血清來源的動物如果本身攜帶病原體，也會污染培養(yǎng)基。
   - 耗材：培養(yǎng)瓶、移液管、離心管等耗材在生產(chǎn)過程中如果沒有經(jīng)過嚴格的質量控制，可能會帶有微生物?；蛘咴谑褂们埃@些耗材沒有進行適當?shù)南咎幚?，如高溫滅菌、環(huán)氧乙烷滅菌等，也會造成污染。 3. 細胞來源污染
  - 從其他實驗室獲取的細胞株如果沒有經(jīng)過嚴格的質量檢測，可能本身就攜帶微生物或者病毒。另外，在原代細胞分離過程中，如果取材的組織或器官沒有進行che底的消毒處理，也會將外界的污染物引入細胞培養(yǎng)體系。
4. 操作人員操作不當
  - 無菌操作意識不足：操作人員沒有嚴格遵守無菌操作規(guī)范是導致細胞污染的重要人為因素。例如，在打開培養(yǎng)瓶、移液等操作過程中，沒有在酒精燈火焰附近進行，使微生物有機會進入培養(yǎng)體系；或者操作時雙手沒有進行充分消毒，將手上的細菌或真菌帶入細胞培養(yǎng)環(huán)境。
  - 交叉污染：在同時處理多種細胞株時，如果沒有更換移液器槍頭、沒有對使用的工具（如鑷子、剪刀）進行充分消毒，可能會導致細胞株之間的交叉污染，使一種細胞株中的微生物傳播到另一種細胞株中。

二、細胞污染的處理方法
1. 細菌污染處理
  - 觀察和判斷：細菌污染通常比較容易觀察到，在顯微鏡下可以看到細胞培養(yǎng)液變渾濁，有大量的細菌在游動。污染的細胞形態(tài)可能會發(fā)生改變，如細胞腫脹、破裂等。
  - 處理措施：一旦發(fā)現(xiàn)細菌污染，最hao的做法是立即丟棄受污染的細胞和培養(yǎng)基，以防止細菌傳播到其他培養(yǎng)細胞。如果細胞非常珍貴，可以嘗試使用抗生素進行處理，但成功率較低。首先要確定污染的細菌種類，通過革蘭氏染色等方法初步判斷是革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌，然后選擇針對性的抗生素。例如，對于革蘭氏陽性菌，可以使用青霉素、鏈霉素等；對于革蘭氏陰性菌，可以使用慶大霉素、卡那霉素等。將抗生素加入到新鮮的培養(yǎng)基中，按照合適的濃度（一般根據(jù)抗生素的說明書和經(jīng)驗確定）和細胞一起培養(yǎng)，觀察細胞狀態(tài)是否有所改善。
2. 真菌污染處理
  - 觀察和判斷：真菌污染在顯微鏡下可以看到絲狀的菌絲或者圓形的酵母菌。受污染的培養(yǎng)瓶內表面可能會出現(xiàn)白色、黑色或綠色的菌斑，培養(yǎng)基也可能會變色。
  - 處理措施：和細菌污染類似，一般建議直接丟棄受污染的細胞和培養(yǎng)基。如果要嘗試挽救，可使用抗真菌藥物，如兩性霉素B、氟康唑等。將藥物加入到新鮮培養(yǎng)基中，不過真菌污染比細菌污染更難處理，挽救成功的概率較低。
3. 支原體污染處理
  - 觀察和判斷：支原體污染比較難以察覺，因為支原體體積很小，在普通顯微鏡下不容易觀察到。但是支原體污染會影響細胞的生長、代謝和基因表達等。可以通過專門的支原體檢測試劑盒（如PCR檢測試劑盒、熒光染色檢測試劑盒等）來確定是否存在支原體污染。
  - 處理措施：如果檢測到支原體污染，有幾種處理方法。一種是使用抗生素，如環(huán)丙沙星、強力霉素等，將其加入培養(yǎng)基中處理一段時間。另一種是采用物理方法，如將細胞在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)數(shù)代，然后反復凍融細胞，使支原體失去活性。還可以使用專門的支原體清除試劑來處理細胞。
4. 交叉污染處理
  - 觀察和判斷：如果細胞形態(tài)、生長特性等突然發(fā)生改變，或者在進行基因表達分析等實驗時發(fā)現(xiàn)細胞的基因特征與預期不符，就可能存在交叉污染。
  - 處理措施：如果懷疑有交叉污染，首先要停止細胞的使用，然后通過細胞鑒定技術（如短串聯(lián)重復序列（STR）分析、染色體核型分析等）來確定細胞的真實身份。如果確實發(fā)生了交叉污染，最好重新獲取正確的細胞株進行培養(yǎng)。